Dėkojame, kad apsilankėte gamtoje.com. Jūsų naudojamos naršyklės versijoje yra ribotas CSS palaikymas. Norėdami gauti geriausius rezultatus, rekomenduojame naudoti naujesnę naršyklės versiją (arba išjungti suderinamumo režimą „Internet Explorer“). Tuo tarpu, norėdami užtikrinti nuolatinę palaikymą, mes rodome svetainę be stiliaus ar „JavaScript“.
Mikrobinis žaizdų augimas dažnai pasireiškia kaip bioplėvelės, trukdančios gydyti ir juos sunku išnaikinti. Nauji sidabriniai tvarsčiai teigia, kad kovoja su žaizdų infekcijomis, tačiau jų antibiofilmo veiksmingumas ir nepriklausomas nuo infekcijų gydymo poveikis paprastai nežinomas. Naudodamiesi in vitro ir in vivo Biofilmo modeliais, esančiais Staphylococcus aureus ir Pseudomonas aeruginosa, mes pranešame apie AG1+ jonų sukeliančių tvarsčių efektyvumą; AG1+ tvarsčiai, kuriuose yra etilendiaminetraacto rūgšties ir benzetonio chlorido (AG1+/EDTA/BC), ir tvarsčių, kuriuose yra sidabro nitrato (Ag oksisaltai). , kurie gamina AG1+, AG2+ ir AG3+ jonus, siekdami kovoti su žaizdos bioplėvele ir jo poveikį gijimui. AG1+ tvarsčiai turėjo minimalų poveikį žaizdos biofilmui in vitro ir pelėms (C57BL/6J). Priešingai, deguonimi prisotintos AG druskos ir AG1+/EDTA/BC padažai žymiai sumažino gyvybingų bakterijų skaičių biofilmuose in vitro ir parodė reikšmingą bakterijų ir EPS komponentų sumažėjimą pelių žaizdų biofilmuose. Šie tvarsčiai turėjo skirtingą poveikį biofilmui užkrėstų ir ne biofilminių žaizdų gijimui, o deguonies pavidalo druskos padažai, turintys daugiau teigiamo poveikio reepitelializacijai, žaizdos dydžiui ir uždegimui, palyginti su kontroliniais gydymo būdais ir kitomis sidabro tvarsliava. Skirtingos sidabro tvarsčių fizikinės ir cheminės savybės gali turėti skirtingą poveikį žaizdos bioplėvele ir gijimui, ir į tai reikėtų atsižvelgti renkantis tvarsliavą, skirtą gydyti biofilmais užkrėstas žaizdas.
Lėtinės žaizdos yra apibrėžiamos kaip „žaizdos, kurios nepavyksta progresuoti per įprastas gydymo stadijas tvarkingai ir laiku“ 1. Lėtinės žaizdos sukuria psichologinę, socialinę ir ekonominę naštą pacientams ir sveikatos priežiūros sistemai. Apskaičiuota, kad metinės NHS išlaidos žaizdoms ir susijusioms gretutinėms ligoms gydyti yra 8,3 milijardo svarų sterlingų 2017–182. Lėtinės žaizdos šiuo metu taip pat yra aktuali problema JAV, nes „Medicare“ apskaičiavo metines pacientų gydymo žaizdas 28,1–96,8 mlrd. USD.
Infekcija yra pagrindinis veiksnys, užkertantis kelią žaizdų gijimui. Infekcijos dažnai pasireiškia kaip bioplėvelės, kurių yra 78% netyčiančių lėtinių žaizdų. Bioplėvelės susidaro, kai mikroorganizmai yra negrįžtamai pritvirtinti prie paviršių, tokių kaip žaizdos paviršiai, ir gali sujungti, kad susidarytų tarpląstelinio polimero (EPS) gaminančios bendruomenės. Žaizdos bioplėvele yra susijęs su padidėjusiu uždegiminiu atsaku, dėl kurio atsiranda audinių pažeidimas, kuris gali atidėti ar užkirsti kelią gydymui4. Audinių pažeidimų padidėjimą iš dalies gali lemti padidėjęs matricos metaloproteinazių, kolagenazės, elastazės ir reaktyviosios deguonies rūšių 5 aktyvumas5. Be to, uždegiminės ląstelės ir bioplėvelės patys yra aukšti deguonies vartotojai, todėl gali sukelti vietinę audinių hipoksiją, išeikvojančios gyvybiškai svarbių deguonies ląsteles, reikalingas veiksmingam audinių atstatymui6.
Subrendusios bioplėvelės yra labai atsparios antimikrobiniams vaistams, reikalaujant agresyvių strategijų, skirtų kontroliuoti bioplėvelės infekcijas, tokias kaip mechaninis gydymas, po kurio seka veiksmingas antimikrobinis gydymas. Kadangi bioplėvelės gali greitai atsinaujinti, veiksmingi antimikrobiniai vaistai gali sumažinti pakartotinio formavimo riziką po chirurginio panaikinimo7.
Sidabras vis dažniau naudojamas antimikrobiniame tvarsliuose ir dažnai naudojamas kaip pirmosios eilės lėtinių užkrėstų žaizdų gydymas. Yra daugybė komerciškai prieinamų sidabrinių tvarsčių, kurių kiekviename yra skirtinga sidabro sudėtis, koncentracija ir pagrindinė matrica. Sidabrinių apyrankių pažanga lėmė naujų sidabrinių apyrankių kūrimą. Metalinė sidabro forma (AG0) yra inertiška; Norint pasiekti antimikrobinį efektyvumą, jis turi prarasti elektroną, kad susidarytų joninis sidabras (AG1+). Tradiciniuose sidabro tvarsliuose yra sidabrinių junginių arba metalinių sidabrų, kurie, veikiami skysčio, suyra, kad susidarytų AG1+ jonai. Šie AG1+ jonai reaguoja su bakterijų ląstele, pašalindami elektronus iš struktūrinių komponentų arba kritinius procesus, reikalingus išgyvenimui. Patentuota technologija paskatino sukurti naują sidabrinį junginį „Ag Oxysalts“ (sidabro nitratą, AG7NO11), kuris yra įtrauktas į žaizdų padažus. Skirtingai nuo tradicinio sidabro, deguonies turinčių druskų skilimas gamina sidabro būsenas, turinčias didesnį valentingumą (AG1+, Ag2+ir Ag3+). In vitro tyrimai parodė, kad maža deguoniesaguotų sidabro druskų koncentracija yra veiksmingesnė nei vieno jonų sidabro (AG1+) prieš patogenines bakterijas, tokias kaip Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus ir Escherichia coli8,9. Kitas naujas sidabro padažo tipas apima papildomus ingredientus, būtent etilendiaminetraacto rūgštį (EDTA) ir benzetonio chloridą (BC), kurie, kaip pranešama, nukreipia į bioplėvelės EPS ir taip padidina sidabro įsiskverbimą į biofilmą. Šios naujos sidabrinės technologijos siūlo naujus būdus, kaip nukreipti žaizdų bioplėveles. Tačiau šių antimikrobinių medžiagų poveikis žaizdos aplinkai ir nuo infekcijų nepriklausomam gydymui yra svarbus norint užtikrinti, kad jie nesukurtų nepalankios žaizdos aplinkos ar atidėtų gijimo. Buvo pranešta apie susirūpinimą dėl sidabro citotoksiškumo in vitro su keliais sidabriniais padažais10,11. Tačiau citotoksiškumas in vitro dar nepavyko į toksiškumą in vivo, o keli AG1+ padažai parodė gerą saugos profilį12.
Čia mes ištyrėme karboksimetilceliuliozės tvarsčių, kuriuose yra naujos sidabro kompozicijos prieš žaizdos bioplėvelę in vitro ir in vivo, efektyvumą. Be to, buvo įvertintas šių tvarsčių poveikis imuniniam atsakui ir gydymo, nepriklausomai nuo infekcijos,.
Visos naudojamos tvarsliados buvo komerciškai prieinamos. 3M „Kerracel“ gelio pluošto padažas (3M, Knutsfordas, JK) yra nejudrobinis 100% karboksimetilceliuliozės (CMC) gelio pluošto padažai, kurie buvo naudojami kaip kontrolinė tvarslė šiame tyrime. Buvo įvertinti trys antimikrobiniai CMC sidabro padažai, būtent 3M Kerracel Ag padažas (3M, Knutsfordas, JK), kuriame yra 1,7 masės%. Deguonimi prisotinta sidabrinė druska (AG7NO11) aukštesniuose valentiniuose sidabro jonuose (AG1+, AG2+ir AG3+). Ag7NO11 skilimo metu Ag1+, Ag2+ ir Ag3+ jonai susidaro santykiu 1: 2: 4. „Aquacel Ag“ papildomas padažas, kuriame yra 1,2% sidabro chlorido (AG1+) (Conventec, Deeside, UK) 13 ir „Aquacel Ag+“ papildomas padažas, kuriame yra 1,2% sidabro chlorido (AG1+), EDTA ir benzetonio chloridas (Conventec, Deeside, UK) 14.
Šiame tyrime naudojamos padermės buvo Pseudomonas Aeruginosa NCTC 10781 (Anglijos visuomenės sveikata, Solsberis) ir Staphylococcus aureus NCTC 6571 (Anglijos visuomenės sveikata, Solsberis).
Bakterijos buvo auginamos per naktį Muller-Hinton sultinyje (Oksoidas, Altrincham, JK). Tada nakvynės kultūra buvo praskiesta 1: 100 Mueller-Hinton sultinyje ir 200 µL padengta steriliomis 0,2 µM Whatman ciklopore membranomis (Whatman PLC, Maidstone, JK) ant Mueller-Hinton agaro plokštelių (Sigma-Aldrich Company Ltd, Kent, Didžioji Britanija) ). ) Kolonijinis bioplėvelių susidarymas 37 ° C temperatūroje 24 valandas. Šios kolonijinės bioplėvelės buvo patikrintos dėl logaritminio susitraukimo.
Plakimą supjaustykite į 3 cm2 kvadratinius gabalus ir prieš „Moisten“ su steriliu dejonizuotu vandeniu. Padėkite tvarsliavą ant kolonijos bioplėvės ant agaro plokštelės. Kas 24 ha bioplėvelės buvo pašalintos, o gyvybingos bakterijos bioplėvelėje (CFU/ml) buvo kiekybiškai įvertintos nuosekliai skiedžiant (10–1 10–7) dienos kampo neutralizavimo sultinyje („Merck-Millipore“). Po 24 valandų inkubacijos 37 ° C temperatūroje, Mueller-Hinton agaro plokštelėse buvo atliktas standartinis plokštelių skaičius. Kiekvienas gydymas ir laiko taškas buvo atliekamas trimis egzemplioriais, o plokštelių skaičius buvo pakartotas kiekvienam skiedimui.
Kiaulienos pilvo oda gaunama iš didelių baltųjų kiaulių moterų per 15 minučių nuo skerdimo pagal Europos Sąjungos eksporto standartus. Oda buvo nusiskuto ir išvalyta alkoholio servetėlėmis, po to 24 valandas užšaldyta -80 ° C temperatūroje, kad oda būtų nugriauta. Po atšildymo 1 cm2 odos gabalai tris kartus buvo plaunami PBS, 0,6% natrio hipochlorito ir 70% etanolio kiekvieną kartą 20 minučių. Prieš pašalindami epidermį, pašalinkite likusį etanolį 3 kartus plaunant steriliame PBS. The skin was cultured in a 6-well plate with a 0.45-μm-thick nylon membrane (Merck-Millipore) on top and 3 absorbent pads (Merck-Millipore) containing 3 ml fetal bovine serum (Sigma) supplemented with 10% Dulbecco's modified Erelis. Vidutinis („Dulbecco“ modifikuota „Eagle Medium“ - „Aldrich Ltd.“).
Kolonijinės bioplėvelės buvo auginamos, kaip aprašyta bioplėvelės ekspozicijos tyrimams. 72 valandas išauginus bioplėvelę ant membranos, bioplėvele buvo uždėtas odos paviršius, naudojant sterilią inokuliacijos kilpą ir pašalinta membrana. Tada bioplėvele buvo inkubuojama ant kiaulės dermos dar 24 valandas 37 ° C temperatūroje, kad biofilmas galėtų subręsti ir prilipti prie kiaulės odos. Po to, kai bioplėvele buvo subrendęs ir pritvirtinus, 1,5 cm2 padažas, iš anksto suderintas su steriliu distiliuotu vandeniu, buvo tepamas tiesiai ant odos paviršiaus ir 24 valandas inkubuojamas 37 ° C temperatūroje. Gyvybingos bakterijos buvo vizualizuotos dažant vienodai taikant „PrestoBlue“ ląstelių gyvybingumo reagentą (Invitrogen, Life Technologies, Paisley, JK) kiekvieno aiškinamojo paviršiaus viršūniniam paviršiui ir inkubuojant jį 5 minutes. Norėdami iškart užfiksuoti vaizdus „Leica MZ8“ mikroskope, naudokite skaitmeninę kamerą „Leica DFC425“. Sritys „Colored Pink“ buvo kiekybiškai įvertintos naudojant „Image Pro Software 10“ versiją („Media Cybernetics Inc“, Rockville, MD Image-Pro (Mediacy.com)). Nuskaitymo elektronų mikroskopija buvo atlikta, kaip aprašyta žemiau.
Bakterijos, užaugintos per naktį, buvo praskiestos 1: 100 Mueller-Hinton sultinyje. Į sterilią 0,2 μM „Whatman Cyclopore“ membraną (Whatman, Maidstone, JK) ir padengta 200 μl kultūros ir padengta Mueller-Hinton agar. Bioplėvelės plokštelės 72 valandas buvo inkubuojamos 37 ° C temperatūroje, kad būtų galima subręsti bioplėvelės susidarymą.
Po 3 dienų bioplėvelės brendimo 3 cm2 kvadratinis tvarstis buvo dedamas tiesiai ant bioplėvelės ir inkubuojamas 37 ° C temperatūroje 24 valandas. Pašalinus tvarsliavą iš bioplėvelės paviršiaus, į kiekvieno bioplėvelės paviršių 20 sekundžių buvo pridėta 1 ml prestoblue ląstelių gyvybingumo reagento (Invitrogen, Waltham, MA). Paviršiai buvo išdžiovinti, kol spalvų pakeitimai buvo įrašyti naudojant „Nikon D2300“ skaitmeninę kamerą („Nikon UK Ltd.“, Kingstonas, JK).
Paruoškite nakvynės kultūras ant Mueller-Hinton agaro, perkelkite atskiras kolonijas į 10 ml Mueller-Hinton sultinio ir inkubuokite purtyklę 37 ° C temperatūroje (100 aps / min). Po nakties inkubacijos kultūra buvo praskiesta 1: 100 Mueller-Hinton sultinyje, o 300 µL buvo pastebėta ant 0,2 μm apskrito „Whatman“ cikloporės membrana (Whatman International, Maidstone, JK) ant Mueller-Hinton agaro ir inkubuojama 37 ° C temperatūroje per 72 valandas per 72 valandas . . Subrendusi bioplėvelė buvo uždėta ant žaizdos, kaip aprašyta toliau.
Visas darbas su gyvūnais buvo atliktas Mančesterio universitete pagal projekto licenciją, kurią patvirtino gyvūnų gerovės ir etinės apžvalgos tarnyba (P8721BD27) ir pagal 2012 m. Peržiūrėtos ASPA paskelbtas gaires. Visi autoriai laikėsi atvykimo gairių. Visuose in vivo tyrimuose buvo naudojamos aštuonių savaičių C57BL/6J pelės (Envigo, Oxon, JK). Pelės buvo anestezuojamos su izofluranu („Piramal Critical Care Ltd“, West Drayton, JK), o jų nugaros paviršiai buvo nusiskuto ir išvalyti. Tada kiekvienai pamai buvo suteikta 2 × 6 mm ekscizinė žaizda, naudojant Stiefel biopsijos perforatorių (Schuco International, Hertfordshire, JK). Dėl biofilmais užkrėstų žaizdų ant membranos užaugintos 72 valandų kolonijinės bioplėvelės, kaip aprašyta aukščiau, iki odos sluoksnio, naudodami sterilią inokuliacijos kilpą iškart po sužalojimo ir išmeskite membraną. Vienas kvadratinis tvarsčio centimetras yra iš anksto suderintas su steriliu vandeniu, kad būtų palaikoma drėgna žaizdos aplinka. Pažymėjimas buvo tepamas tiesiai ant kiekvienos žaizdos ir padengti 3M tegaderm plėvele (3M, Bracknell, JK) ir „Mastisol“ skystų klijų (Exququest Healthcare, Ferndale, MI), pritaikytos aplink kraštus, kad užtikrintų papildomą sukibimą. Buprenorfinas (Animalcare, York, JK) buvo skiriamas 0,1 mg/kg koncentracija kaip analgetikas. Cull Pelės praėjus trims dienoms po sužalojimo, naudodamiesi 1 sąrašo metodu, ir pašalinkite, perpus ir laikykite žaizdos plotą.
Pagal gamintojo protokolą buvo atliktas hematoksilinas („Thermofisher Scientific“) ir eozino („Thermofisher Scientific“) dažymas. Žaizdų plotas ir reepithelializacija buvo kiekybiškai įvertinti naudojant „Image Pro Software 10“ versiją („Media Cybernetics Inc“, Rockville, MD).
Audinių skyriai buvo dedami į ksileną („Thermofisher Scientific“, Loughborough, JK), rehidratuotos 100–50% laipsnio etanoliu ir trumpai panardintos į dejonizuotą vandenį („Thermofisher Scientific“). Imunohistochemija buvo atlikta naudojant „Vectastain Elite ABC PK-6104“ rinkinį („Vector Laboratories“, Burlingame, CA) pagal gamintojo protokolą. Pirminiai neutrofilų antikūnai NIMP-R14 („Thermofisher Scientific“) ir makrofagai MS CD107B Pure M3/84 (BD Biosciences, Wokingham, JK) buvo praskiedžiami 1: 100 blokuojant tirpalą ir pridedant prie supjaustyto paviršiaus, o po to-2 antikūnų antikūnai, anti-, vektastainas. ABC ir vektoriniai „Nova“ raudonos peroksidazės (HRP) substrato rinkinys (vektorių laboratorijos, Burlingame, CA) ir surišta hematoksilinu. Vaizdai buvo gauti naudojant „Olympus BX43“ mikroskopą ir „Olympus DP73“ skaitmeninę kamerą (Olympus, Southend-on-Sea, JK).
Odos mėginiai buvo fiksuoti 2,5% glutaraldehido ir 4% formaldehido 0,1 M HEPES (pH 7,4) 24 valandas 4 ° C temperatūroje. Mėginiai buvo dehidratuoti naudojant laipsnišką etanolį ir džiovinami CO2, naudojant „Quorum K850“ kritinio taško džiovintuvą („Quorum Technologies Ltd“, Loughton, JK) ir dulkių dengtas aukso-paladžio lydiniu, naudojant „Quorum SC7620“ mini purškimo/švytėjimo išleidimo sistemos. Mėginiai buvo pavaizduoti naudojant FEI Quanta 250 skenavimo elektronų mikroskopą („Thermofisher Scientific“), kad būtų galima vizualizuoti centrinį žaizdos tašką.
Toto-1 jodidas (2 μM) buvo uždėtas ant išpjaustyto pelės žaizdos paviršiaus ir inkubuotas 5 minutes 37 ° C temperatūroje („Thermofisher Scientific“) ir apdorotas SYTO-60 (10 μm) esant 37 ° C („Thermofisher Scientific“). 15 minučių „Z-Stack“ vaizdai buvo sukurti naudojant „Leica TCS SP8“.
Biologiniai ir techniniai pakartojimo duomenys buvo pateikiami lentelėse ir analizuojami naudojant „GraphPad Prism V9“ programinę įrangą („GraphPad Software“, La Jolla, CA). Vienpusė dispersijos analizė su keliais palyginimais, naudojant Dunnett post hoc testą, buvo naudojama kiekvieno gydymo ir nejudrobinio kontrolinio tvarto skirtumams patikrinti. P vertė <0,05 buvo laikoma reikšminga.
Sidabrinių gelio pluoštinių tvarsčių efektyvumas pirmiausia buvo įvertintas Staphylococcus aureus ir Pseudomonas aeruginosa biofilmų kolonijose in vitro. Sidabriniuose tvarsliuose yra skirtingos sidabro formulės: tradiciniai sidabriniai tvarsčiai gamina AG1+ jonus; Sidabriniai tvarsčiai, kurie gali gaminti AG1+ jonus pridėjus EDTA/BC, gali sunaikinti bioplėvelės matricą ir, esant antibakteriniam sidabro poveikiui antibakteriniu poveikiu, bakterijas. Jonai15 ir tvarsčiai, kuriuose yra deguonimi prisotintų Ag druskų, gaminančių AG1+, AG2+ ir Ag3+ jonus. Jo veiksmingumas buvo lyginamas su nejudinančiu kontroliniu tvarsčiu, pagamintu iš gelinių pluoštų. Likusios gyvybingos bakterijos bioplėvelėje buvo įvertintos kas 24 valandas 8 dienas (1 paveikslas). 5 dieną bioplėvele buvo iškastas 3,85 × 105S. Staphylococcus aureus arba 1,22 × 105p. Aeruginosa įvertinti bioplėvelės atkūrimą. Palyginti su nejudrobinių kontrolinių tvarsliavimais, AG1+ tvarsliavimai turėjo minimalų poveikį bakterijų gyvybingumui Staphylococcus aureus ir Pseudomonas aeruginosa biofilmuose per 5 dienas. Priešingai, tvarsčiai, kuriuose yra deguonimi prisotintų AG ir AG1 + + EDTA/BC druskos, buvo veiksmingos žudant bakterijas per biofilmą per 5 dienas. Po pakartotinio inokuliacijos planktoninėmis bakterijomis 5 dieną, bioplėvelės atkūrimo nepastebėta (1 pav.).
Perspektyvių bakterijų kiekybinis įvertinimas Staphylococcus aureus ir Pseudomonas aeruginosa biofilmose po gydymo sidabriniais padažais. Staphylococcus aureus ir Pseudomonas aeruginosa bioplėvelės kolonijos buvo apdorotos sidabro tvarsliava arba ne antimikrobinių kontrolinių tvarsčių, o likusių gyvybingų bakterijų skaičius buvo nustatytas kas 24 valandas. Po 5 dienų bioplėvele buvo iškastas 3,85 × 105S. Staphylococcus aureus arba 1,22 × 105p. Bakterioplanktono Pseudomonas aeruginosa kolonijos buvo suformuotos atskirai, siekiant įvertinti bioplėvelės atsigavimą. Grafikai rodo vidurkį +/- standartinė klaida.
Norint vizualizuoti sidabro tvarsčių poveikį bioplėvelės gyvybingumui, padažai buvo pritaikyti subrendusioms bioplėvelėms, išaugintoms ant kiaulės odos ex vivo. Po 24 valandų padažas pašalinamas, o biofilmas dažomas mėlynu reaktyviu dažu, kurį gyvos bakterijos metabolizuoja iki rausvos spalvos. Bioplėvelės, gydomos kontroliniais tvarsliava, buvo rausvos, tai rodo gyvybingų bakterijų buvimą bioplėvelėje (2A paveikslas). Priešingai, bioplėvelėje, gydoma Ag oksisolių tvarsliava, daugiausia buvo mėlyna, tai rodo, kad likusios bakterijos ant kiaulės odos paviršiaus buvo negyvingos bakterijos (2B paveikslas). Mišri mėlynos ir rausvos spalvos spalva buvo pastebėta biofilmuose, apdorotuose Ag1+ turinčiuose tvarsliuose, ir tai rodo gyvybingų ir negyvybingų bakterijų buvimą bioplėvelėje (2C paveikslas), tuo tarpu EDTA/BC padažai, kuriuose yra AG1+, buvo daugiausia mėlynos spalvos su kai kuriomis rožinėmis dėmėmis. nurodant sritis, kurios neturi įtakos sidabro padažui (2d pav.). Aktyvių (rožinių) ir neaktyvių (mėlynos) sričių kiekybinis įvertinimas parodė, kad kontrolinis pleistras buvo 75% aktyvus (2E pav.). AG1 + + EDTA/BC padažai buvo atlikti panašiai kaip deguonimi prisotintos Ag druskos padažai, kurių išgyvenamumas buvo atitinkamai 13% ir 14%. AG1+ padažas taip pat sumažino bakterijų gyvybingumą 21%. Tada šios bioplėvės buvo stebimos naudojant skenavimo elektronų mikroskopiją (SEM). Po gydymo kontroliniu padažu ir AG1+ padažu, buvo pastebėtas Pseudomonas aeruginosa sluoksnis, apimantis kiaulės odą (2f pav., H), tuo tarpu po gydymo AG1+ tvarsliavimu buvo rasta nedaug bakterinių ląstelių ir buvo rasta nedaug bakterinių ląstelių. Kolageno pluoštai gali būti laikomi kiaulės odos audinių struktūra (2G paveikslas). Po gydymo Ag1 + + EDTA/BC padažu, bakterijų plokštelėmis ir apatinėmis kolageno pluošto plokštelėmis (2I paveikslas) buvo matomos.
Pseudomonas aeruginosa biofilmo vizualizacija po sidabro apdorojimo. (A-D) Bakterijų gyvybingumas Pseudomonas aeruginosa biofilmose, užaugintose ant kiaulės odos, buvo vizualizuotos naudojant prestoblue gyvybingumo dažus 24 valandas po gydymo sidabro tvarsliavomis arba ne antimikrobinių kontrolinių tvarsčių. Gyvos bakterijos yra rausvos, negyvos bakterijos ir kiaulės oda yra mėlynos. (E) Pseudomonas aeruginosa biofilmų, auginamų ant kiaulės odos (rožinė dėmė), kiekybinis įvertinimas, naudojant skenavimo elektroninės mikroskopijos vaizdo 10 versijos (FI), ir 24 valandas apdorojamos sidabriniu tvarsčiu arba nejudinančiu valdymo tvarsčiu 24 valandas. SEM skalės juosta = 5 µm. (J - M) Kolonijinės bioplėvelės augo ant filtrų ir po 24 valandų inkubacijos su sidabriniais padažais buvo nudažytos išankstiniais reaktyviais dažais.
Norint nustatyti, ar artimas tvarsčių ir bioplėvelių kontaktas paveikė tvarsčių efektyvumą, kolonijinės bioplėvelės, uždėtos ant lygaus paviršiaus, buvo apdorotos tvarsčiais 24 valandas ir po to dažomos reaktyviais dažais. Neapdorotas bioplėvele buvo tamsiai rausvos spalvos (2J paveikslas). Priešingai nei bioplėvelės, apdorotos tvarsliava, kurioje yra deguonimi prisotintos Ag druskos (2K paveikslas), bioplėvelės, apdorotos tvarsliava, turinčiomis AG1+ arba Ag1++ EDTA/BC, parodė rausvos dažymo juostas (2L pav., M). Šis rausvas dažymas rodo gyvybingų bakterijų buvimą ir yra susijusi su siūlų plotu, esančiame padaže. Šios siuvamos vietos sukuria negyvas erdves, leidžiančias bioplėvelės bakterijas išgyventi.
Norint įvertinti sidabro tvarsčių in vivo efektyvumą, pilno storio pelių, užkrėstų subrendusiu S. aureus ir P. aeruginosa biofilmomis, žaizdos buvo gydomos neantimikrobiniais kontroliniais tvarsliais arba sidabro tvarsliava. Po 3 gydymo dienų makroskopinė vaizdo analizė parodė mažesnius žaizdų dydžius, kai jie buvo apdoroti deguonimi priskirtais druskos padažais, palyginti su ne antimikrobinių kontrolinių tvarsčių ir kitų sidabro padažų (3A-H pav.). Norint patvirtinti šiuos stebėjimus, žaizdos buvo nuimtos ir žaizdos plotas, o reepitelializacija buvo kiekybiškai įvertinta hematoksilino ir eozino dažytų audinių skyriuose, naudojant „Image Pro“ programinės įrangos 10 versiją (3i-L pav.).
Sidabrinių tvarsčių poveikis žaizdos paviršiui ir žaizdų, užkrėstų bioplėvelėmis, pakartotinai epitelializacijos. (A - H) Mažos ląstelės, užkrėstos Pseudomonas aeruginosa (A - D) ir Staphylococcus aureus (E - H) bioplėvėmis po trijų dienų gydymo neantimikrobiniu kontroliniu tvarsčiu, deguonies pavidalo druskos apdaila, AG1+ tvarsliava ir AG1+ Persirengimas. Reprezentatyvūs makroskopiniai vaizdai. Pelių žaizdos su AG1 + + EDTA/BC padažu. (IL) Reprezentacinė Pseudomonas aeruginosa infekcija, histologiniai pjūviai, dažyti hematoksilinu ir eozinu, naudojami žaizdos plotui ir epitelio regeneracijai įvertinti. Žaizdų ploto (M, O) ir procentinių žaizdų (N, P) kiekybinių žaizdų, užkrėstų Pseudomonas aeruginosa (M, N) ir Staphylococcus aureus (O, P) biofilmais (pagal gydymo N = 12), kiekybinis įvertinimas (N, P). Grafikai rodo vidurkį +/- standartinė klaida. * reiškia p = <0,05 ** reiškia p = <0,01; Makroskopinė skalė = 2,5 mm, histologinė skalė = 500 μm.
Žaizdų, užkrėstų Pseudomonas aeruginosa biofilmu (3M paveikslas), kiekybinis žaizdų plotas parodė, kad žaizdų, apdorotų Ag oksisaltų, vidutinis žaizdos dydis buvo 2,5 mm2, o ne antimikrobinės kontrolės tvarsčio vidutinis žaizdos dydis buvo 3,1 mm2, o tai nėra antimikrobinės kontrolės. Tiesa. pasiekė statistinį reikšmingumą (3M paveikslas). p = 0,423). Žaizdos, apdorotos AG1+ arba AG1++ EDTA/BC, žaizdos plotas nesumažėjo (atitinkamai 3,1 mm2 ir 3,6 mm2). Gydymas deguonimi prisotinta Ag druskos padažu skatino pakartotinį epitelializaciją labiau nei ne antimikrobinis kontrolinė tvarstis (atitinkamai 34% ir 15%; P = 0,029) ir Ag1+ arba AG1++ EDTA/BC (10% ir 11%) (10%) (10% ir 11%) ( 3N paveikslas). . , atitinkamai).
Panašios žaizdų srities ir epitelio regeneracijos tendencijos buvo pastebėtos žaizdose, užkrėstose S. aureus bioplėvelėmis (3o paveikslas). Pažymėjimas, kuriame yra deguonimi prisotintų sidabro druskų, sumažino žaizdos plotą (2,0 mm2) 23%, palyginti su kontroliniu nejudrobialiniu padažu (2,6 mm2), nors šis sumažėjimas nebuvo reikšmingas (P = 0,304) (3o pav.). Be to, AG1+ gydymo grupės žaizdos plotas buvo šiek tiek sumažintas (2,4 mm2), o žaizda, gydoma AG1++ EDTA/BC padažu, nesumažino žaizdos ploto (2,9 mm2). Ag deguonies druskos taip pat skatino žaizdų, užkrėstų S. aureus bioplėvele (31%), pakartotiniu būdu (31%), nei tie, kurie buvo gydomi ne antimikrobinių kontrolinių tvarsčių (12%, p = 0,003) (3P pav.). Ag1+ tvarstis (16%, p = 0,903) ir Ag+ 1+ EDTA/BC padažas (14%, P = 0,965) parodė epitelio regeneracijos lygį, panašų į kontrolinį.
Norint vizualizuoti sidabro tvarsčių poveikį bioplėvelės matricai, buvo atliktas dažymas „TOTO 1“ ir „Syto 60“ jodido (4 pav.). TOTO 1 jodidas yra ląstelėje nepraleidžiamas dažas, kuris gali būti naudojamas tiksliai vizualizuoti tarpląstelines nukleorūgštis, kurių gausu biofilmų EPS. „Syto 60“ yra ląstelių pralaidūs dažai, naudojami kaip priešprieša16. TOTO 1 ir SYTO 60 jodido stebėjimai žaizdose, pastatytose Pseudomonas aeruginosa (4A-D pav.) Ir Staphylococcus aureus (4i-L paveikslas) biofilmais (4i-L paveikslas) parodė, kad po 3 dienų apdorojimo, EPS biofilme buvo žymiai sumažėjęs. turintys deguonimi prisotintų druskų AG ir AG1 + + EDTA/BC. AG1+ tvarsliados be papildomų antibiofilmo komponentų reikšmingai sumažino DNR, be ląstelių, žaizdose, pastatytose su Pseudomonas aeruginosa, tačiau buvo mažiau veiksmingos žaizdose, pastatytomis su Staphylococcus aureus.
Po 3 dienų gydymo su kontroliniais ar sidabriniais tvarsliavimais in vivo vaizduojant žaizdos bioplėvę. Konfokaliniai Pseudomonas aeruginosa (A - D) ir Staphylococcus aureus (I - L) vaizdai, dažyti TOTO 1 (žalia), kad būtų galima vizualizuoti tarpląstelines nukleorūgštis, tarpląstelinių biofilmo polimerų komponentą. Norėdami nudažyti tarpląstelines nukleorūgštis, naudokite Syto 60 (raudona). rūgštys. P. Pseudomonas aeruginosa (E - H) ir Staphylococcus aureus (M - P) bioplėvelės po 3 dienų gydymo kontrolės ir sidabro tvarsliava. SEM skalės juosta = 5 µm. Konfokalinės vaizdo skalės juosta = 50 µm.
Nuskaitymo elektroninė mikroskopija parodė, kad pelės, pastatytos Pseudomonas aeruginosa (4E-H pav.) Ir Staphylococcus aureus (4M-P pav.), Biofilmų kolonijose (4M-P) po 3 dienų buvo žymiai mažiau bakterijų po 3 dienų gydymo visais sidabriniais pasipriešinimais.
Norint įvertinti sidabro tvarsčių poveikį biofilmams užkrėstų pelių žaizdų uždegimui, biofilmais užkrėstų žaizdų, apdorotų kontrolinėmis ar sidabro tvarsliava, skyriai 3 dienas buvo imunohistochemiškai nudažytos naudojant antikūnus, būdingus neutrofilams ir makrofagams. Kiekybinis neutrofilų ir makrofagų nustatymas viduje. granuliavimo audinys. 5 paveikslas). Visi sidabriniai tvarsliavimai sumažino neutrofilų ir makrofagų skaičių žaizdose, užkrėstuose Pseudomonas aeruginosa, palyginti su ne antimikrobinių kontrolinių tvarsčių po tris gydymo dienas. Tačiau gydymas deguonimi prisotinta sidabro druskos padažu padidino neutrofilų (P = <0,0001) ir makrofagų (P = <0,0001) sumažėjimą, palyginti su kitais tirtais sidabro padažais (5i, J pav.). Nors AG1++ EDTA/BC turėjo didesnį poveikį žaizdos bioplėvelei, jis sumažino neutrofilų ir makrofagų lygį mažesniu mastu nei AG1+ apsirengimas. Vidutinės žaizdos, užkrėstos S. aureus biofilmu, taip pat buvo stebimos po to, kai apsirengė Ag (P = <0,0001), Ag1+ (P = 0,0008) ir Ag1 ++ EDTA/BC (P = 0,0043) oksisoliais, palyginti su kontrole. Panašios tendencijos pastebimos neutropenijai. tvarstis (5k pav.). Tačiau tik deguonimi prisotintas Ag druskos tvarstis pastebimai sumažėjo makrofagų skaičius granuliacinio audinyje, palyginti su kontrolinėmis žaizdomis, užkrėstomis S. aureus biofilmais (p = 0,0339) (5L pav.).
Neutrofilai ir makrofagai buvo kiekybiškai įvertinti žaizdose, užkrėstose Pseudomonas aeruginosa ir Staphylococcus aureus biofilmose po 3 dienų gydymo ne antimikrobiniu kontrole ar sidabro tvarsliava. Neutrofilai (AD) ir makrofagai (EH) buvo kiekybiškai įvertinti audinių skyriuose, dažytuose antikūnais, būdingais neutrofilams ar makrofagams. Neutrofilų (I ir K) ir makrofagų (J ir L) kiekybinis įvertinimas žaizdose, užkrėstose Pseudomonas aeruginosa (I ir J) ir Staphylococcus aureus (K&L) biofilmuose. N = 12 vienai grupei. Grafikai rodo vidurkį +/- Standartinė klaida, reikšmingumo vertės, palyginti su ne antibakteriniu kontrolės padažu, * reiškia p = <0,05, ** reiškia p = <0,01; *** reiškia p = <0,001; rodo p = <0,0001).
Tada mes įvertinome sidabro tvarsčių poveikį nuo infekcijų nepriklausomam gijimui. Neužkrėstos ekscifinės žaizdos 3 dienas buvo gydomos ne indėnų kontroliniu padažu arba sidabriniu padažu (6 paveikslas). Tarp tiriamų sidabro tvarsčių tik žaizdos, apdorotos deguonies druskos padažu, makroskopiniuose vaizduose atrodė mažesnės nei su kontrolinėmis žaizdomis (6A-D pav.). Žaizdos ploto kiekybinis įvertinimas naudojant histologinę analizę parodė, kad vidutinis žaizdos plotas po gydymo Ag oksisolių tvarsliavimu buvo 2,35 mm2, palyginti su 2,96 mm2 žaizdoms, gydomoms kontrolinei grupei, tačiau šis skirtumas nepasiekė statistinio reikšmingumo (p = 0,488) (pav. Fig. Fig. Fig. Fig. Fig. Fig. . Po gydymo Ag1+ (3,38 mm2, p = 0,757) arba Ag1++ EDTA/BC (4,18 mm2, p = 0,054) tvarsliavos, palyginti su kontroline grupe, priešingai, po žaizdos ploto sumažėjimo nepastebėta. Padidėjęs epitelio regeneracija buvo pastebėta naudojant Ag oksizolio padažą, palyginti su kontroline grupe (atitinkamai 30%, palyginti su 22%), nors tai nepasiekė reikšmingumo (p = 0,067), tai yra gana reikšminga ir patvirtina ankstesnius rezultatus. Persirengimas su okizoliais skatina pakartotinį epitelializaciją. -Neužkrėstų žaizdų epitelizavimas17. Priešingai, gydymas AG1+ arba AG1++ EDTA/BC padažai neturėjo jokio poveikio arba neparodė sumažėjusios pakartotinio epitelializacijos, palyginti su kontrole.
Sidabrinės žaizdos padažo poveikis neužkrėstų pelių žaizdų gijimui su visiška rezekcija. (AD) reprezentatyvūs makroskopiniai žaizdų vaizdai po trijų dienų apdorojimo, naudodamas ne indimikrobinį kontrolinį padažą ir sidabrinį padažą. (EH) reprezentacinės žaizdos sekcijos, dažytos hematoksilinu ir eozinu. Žaizdos ploto (I) ir reepitelializacijos (J) procentinė įvertinimas buvo apskaičiuotas iš histologinių sekcijų žaizdos viduryje, naudojant vaizdo analizės programinę įrangą (n = 11–12 vienai gydymo grupei). Grafikai rodo vidurkį +/- standartinė klaida. * reiškia p = <0,05.
Sidabras ilgą laiką naudoja kaip antimikrobinis gydymas žaizdų gijime, tačiau daugybė skirtingų kompozicijų ir gimdymo metodų gali sukelti antimikrobinio veiksmingumo skirtumus 18. Be to, specifinių sidabro pristatymo sistemų antibiofilmo savybės nėra iki galo suprantamos. Nors šeimininko imuninis atsakas yra gana efektyvus prieš planktonines bakterijas, jis paprastai yra mažiau efektyvus prieš bioplėvinius19. Planktoninės bakterijos lengvai fagocitizuojasi makrofagais, tačiau biofilmuose apibendrintos ląstelės kelia papildomų problemų, ribodamos šeimininko atsaką tiek, kiek imuninės ląstelės gali patirti apoptozę ir išsiskirti užuždegiminius veiksnius, kad sustiprintų imuninį atsakymą20. Pastebėta, kad kai kurie leukocitai gali prasiskverbti į biofilms21, tačiau nesugeba fagocitozės bakterijų, kai ši gynyba bus pažeista22. Holistinis metodas turėtų būti naudojamas palaikant šeimininko imuninį atsaką prieš žaizdos bioplėvelės infekciją. Žaizdos apklausa gali fiziškai sutrikdyti bioplėvelę ir pašalinti didžiąją dalį biologinės medžiagos, tačiau šeimininko imuninis atsakas gali būti neveiksmingas, palyginti su likusiu bioplėvele, ypač jei šeimininko imuninis atsakas yra pažeistas. Taigi antimikrobinis gydymas, pavyzdžiui, sidabro tvarsliava, gali palaikyti šeimininko imuninį atsaką ir pašalinti bioplėvelės infekcijas. Kompozicija, koncentracija, tirpumas ir gimdymo substratas gali paveikti sidabro antimikrobinį efektyvumą. Pastaraisiais metais sidabro perdirbimo technologijos pažanga padarė šiuos padažus efektyvesnius 9,23. Tobulėjant sidabro apsirengimo technologijai, svarbu suprasti šių tvarsčių veiksmingumą kontroliuojant žaizdų infekciją ir, dar svarbiau, šių stiprių sidabro formų poveikį žaizdų aplinkai ir gijimui.
Šiame tyrime mes palyginome dviejų pažengusių sidabro tvarsčių efektyvumą su įprastiniais sidabro tvarsliais, kurie gamina AG1+ jonus prieš bioplėveles, naudojant skirtingus in vitro ir in vivo modelius. Mes taip pat įvertinome šių tvarsčių poveikį žaizdos aplinkai ir nuo infekcijų nepriklausomam gydymui. Siekiant sumažinti pristatymo matricos įtaką, visi tiriami sidabriniai tvarsčiai buvo sudaryti iš karboksimetilceliuliozės.
Mūsų išankstinis šių sidabrinių tvarsčių įvertinimas prieš Pseudomonas aeruginosa ir Staphylococcus aureus kolonijines bioplėves rodo, kad, skirtingai nuo tradicinių AG1+ tvarsčių, du pažengę sidabro tvarsliavimai, Ag1++ EDTA/BC ir deguonies pavidalo druskos, veiksmingai žudo biofilmo bakterijas. kelias dienas. Be to, šie tvarsčiai užkerta kelią bioplėvelės iš naujo suformuoti pakartotinai veikiant planktonines bakterijas. AG1+ padaže buvo sidabro chloridas, tas pats sidabro junginys ir bazinė matrica kaip AG1++ EDTA/BC, ir tuo pačiu laikotarpiu turėjo ribotą poveikį bakterijų gyvybingumui bioplėvelėje. Stebėjimas, kad AG1++ EDTA/BC padažas buvo veiksmingesnis prieš bioplėvelę nei AG1+ tvarstis, susidedanti iš tos pačios matricos, o sidabro junginys palaiko nuostatą, kad norint padidinti sidabro chlorido veiksmingumą prieš biofilmą, reikia papildomų ingredientų, kaip pranešta, kaip pranešta kitur 15. Šie rezultatai patvirtina mintį, kad BC ir EDTA vaidina papildomą vaidmenį, prisidedantį prie bendro aprangos efektyvumo ir kad šio komponento nebuvimas AG1+ tvarsliuose galėjo prisidėti prie to, kad nepavyko parodyti veiksmingumo in vitro. Mes nustatėme, kad deguonimi prisotintos Ag druskos padažai, gaminantys AG2+ ir Ag3+ jonus, pasižymėjo stipresniu antibakteriniu veiksmingumu nei AG1+, ir tokiu lygiu, panašiu į AG1++ EDTA/BC. Tačiau dėl didelio redokso potencialo neaišku, kiek laiko Ag3+ jonai išlieka aktyvūs ir veiksmingi nuo žaizdų bioplėvelių, todėl verta toliau tyrinėti. Be to, yra daugybė skirtingų tvarsčių, kurie sukuria AG1+ jonus, kurie nebuvo tiriami šiame tyrime. Šiuos tvarsčius sudaro skirtingi sidabro junginiai, koncentracijos ir bazinės matricos, kurios gali turėti įtakos AG1+ jonų tiekimui ir jų efektyvumui prieš bioplėveles. Taip pat verta paminėti, kad in vitro ir in vivo modelių yra daug skirtingų žaizdų tvarsčių veiksmingumo prieš bioplėveles. Naudoto modelio tipas, taip pat šiuose modeliuose naudojamos terpės druskos ir baltymų kiekis turės įtakos padažo efektyvumui. Savo in vivo modelyje mes leidome biofilmui subręsti in vitro, o po to perdavėme jį į odos žaizdos paviršių. Šeimininko pelės imuninis atsakas yra gana efektyvus prieš žaizdą uždedamas planktonines bakterijas, tokiu būdu suformuojant bioplėvelę, kai žaizda gydo. Pridėjus subrendusį bioplėvelę prie žaizdos, ribojamas šeimininko imuninio atsako į bioplėvelės formavimąsi veiksmingumą, leidžiant subrendusiam biofilmui įsitvirtinti žaizdoje prieš pradedant gydymą. Taigi, mūsų modelis leidžia mums įvertinti antimikrobinių tvarsčių efektyvumą subrendusiose bioplėvelėse prieš pradedant žaizdas.
Mes taip pat nustatėme, kad aprangos tinkamumas turėjo įtakos sidabrinių tvarsčių efektyvumui in vitro užaugintose bioplėvelėse ir kiaulės odoje. Atidus kontaktas su žaizda yra laikomas kritišku, siekiant priešpriešinio 24,25 antimikrobinio veiksmingumo. Pažymėjimas, kuriame yra deguonimi prisotintų Ag druskų, buvo glaudžiai kontaktuojamos su subrendusiomis bioplėvelėmis, todėl po 24 valandų žymiai sumažėjo gyvybingų bakterijų skaičius bioplėvelėje. Priešingai, kai buvo gydomi AG1+ ir AG1++ EDTA/BC padažai, liko nemažas skaičius gyvybingų bakterijų. Šiose tvarsliuose yra siūlų per visą padažo ilgį, kuris sukuria negyvas erdves, kurios neleidžia glaudžiai kontaktui su bioplėvele. Mūsų tyrimuose in vitro šios nekontaktinės sritys neleido žudyti gyvybingų bakterijų bioplėvelėje. Bakterijų gyvybingumą įvertinome tik po 24 valandų gydymo; Laikui bėgant, kai tvarstis tampa labiau prisotintas, gali būti mažiau negyvos vietos, sumažinant šių perspektyvių bakterijų plotą. Tačiau tai pabrėžia padažo kompozicijos svarbą, o ne tik sidabro tipą padaže.
Nors in vitro tyrimai yra naudingi norint palyginti skirtingų sidabro technologijų efektyvumą, taip pat svarbu suprasti šių tvarsčių poveikį bioplėvelėms in vivo, kur šeimininko audiniai ir imuninis atsakas prisideda prie tvarsčių veiksmingumo prieš bioplėveles. Šių tvarsčių poveikis žaizdų bioplėveliams buvo pastebėtas naudojant skenavimo elektronų mikroskopiją ir EPS dažymą bioplėvelėje, naudojant tarpląstelinius ir tarpląstelinius DNR dažus. Mes nustatėme, kad po 3 dienų apdorojimo visi tvarsčiai buvo veiksmingi mažinant biofilmo infekuotų žaizdų DNR be ląstelių, tačiau AG1+ padažai buvo mažiau veiksmingi Staphylococcus aureus infekuotose žaizdose. Skenavimo elektronų mikroskopija taip pat parodė, kad žaizdose, apdorotose sidabro tvarsliuose, buvo žymiai mažiau bakterijų, nors tai buvo ryškiau su deguonimi priskirtu Ag druskos padažu ir AG1++ EDTA/BC padažu, palyginti su AG1+ padažu. Šie duomenys rodo, kad tiriami sidabro padažai turėjo skirtingą poveikį bioplėvelės struktūrai, tačiau nė vienas iš sidabrinių tvarsčių negalėjo išnaikinti bioplėvelės ir patvirtina holistinio požiūrio į žaizdų biofilmo infekcijų gydymą poreikį; Sidabrinių rankinių naudojimas. Prieš gydymą fizinis skiedimas, kad būtų pašalinta didžioji dalis bioplėvelės.
Lėtinės žaizdos dažnai būna sunkios uždegimo būsenoje, kai uždegiminės ląstelės ilgą laiką liko žaizdos audinyje, todėl audinių pažeidimai ir išeikvoja deguonį, reikalingą efektyviam ląstelių metabolizmui ir funkcijai žaizdoje26. Bioplėvelės sustiprina šią priešišką žaizdos aplinką, neigiamai paveikdamos gydymą įvairiais būdais, įskaitant ląstelių proliferacijos slopinimą ir proinuždegiminių citokinų27 migraciją bei aktyvaciją. Kai sidabro tvarsliava tampa veiksmingesni, svarbu suprasti jų poveikį žaizdų aplinkai ir gydymui.
Įdomu tai, kad nors visi sidabriniai tvarsčiai paveikė bioplėvelės sudėtį, tik deguonimi prisotintos sidabro druskos padažai padidino šių užkrėstų žaizdų pakartotinį epitelializaciją. Šie duomenys patvirtina mūsų ankstesnes išvadas17 ir Kalan et al. (2017) 28, kuris parodė gerus deguonies sidabrinių druskų saugumo ir toksiškumo profilius, nes mažesnė sidabro koncentracija buvo veiksminga prieš bioplėveles.
Dabartinis mūsų tyrimas pabrėžia sidabro technologijos skirtumus tarp antimikrobinių sidabro padažų ir šios technologijos poveikio žaizdų aplinkai ir nuo infekcijų nepriklausomam gydymui. Tačiau šie rezultatai skiriasi nuo ankstesnių tyrimų, rodančių, kad AG1 + + EDTA/BC padažas pagerino sužeistų triušių ausų gijimo parametrus in vivo. Tačiau taip gali būti dėl gyvūnų modelių skirtumų, matavimo laiko ir bakterinio taikymo metodų29. Tokiu atveju žaizdų matavimai buvo atlikti praėjus 12 dienų po sužalojimo, kad aktyvios aprangos medžiagos galėtų veikti bioplėvelėje per ilgesnį laiką. Tai patvirtina tyrimas, kuris parodė, kad kliniškai užkrėstos kojų opos, apdorotos AG1 + + EDTA/BC Nenaudojamų medžiagų naudojimas. Narkotikai. CMC padažai, siekiant sumažinti opų30 dydį.
Anksčiau buvo įrodyta, kad tam tikros sidabro formos ir koncentracijos yra citotoksinės 11 in vitro, tačiau šie in vitro rezultatai ne visada reiškia neigiamą poveikį in vivo. Be to, sidabro technologijos pažanga ir geresnis sidabrinių junginių ir koncentracijų supratimas ir tvarsčių koncentracija lėmė daugybę saugių ir veiksmingų sidabro padažų. Tačiau, tobulėjant sidabro padažo technologijai, svarbu suprasti šių padažų poveikį žaizdų aplinkai31,32,33. Anksčiau buvo pranešta, kad padidėjęs reepitelializacijos greitis atitinka padidėjusią priešuždegiminių M2 makrofagų dalį, palyginti su uždegiminiu M1 fenotipu. Tai buvo pastebėta ankstesniame pelės modelyje, kuriame sidabro hidrogelio žaizdų padažai buvo lyginami su sidabriniu sulfadiazinu ir ne antimikrobiniu hidrogels34.
Lėtinės žaizdos gali turėti per didelį uždegimą ir pastebėta, kad neutrofilų perteklius gali būti žalingas žaizdų gijimui35. Tyrime su neutrofilų pelių pelių, neutrofilų buvimas atidėtas reepitelializacija. Dėl perteklinių neutrofilų perteklinių proteazių ir reaktyviųjų deguonies rūšių, tokių kaip superoksidas ir vandenilio peroksidas, yra susiję su lėtinėmis ir lėtai gėdinančiomis žaizdomis37,38. Panašiai makrofagų skaičiaus padidėjimas, jei nekontroliuojamas, gali sukelti uždelstą žaizdų gijimą39. Šis padidėjimas yra ypač svarbus, jei makrofagai nesugeba pereiti nuo priešuždegiminio fenotipo prie gydomojo fenotipo, todėl žaizdos nesugebėjo išeiti iš uždegiminės gydymo fazės40. Po 3 dienų gydymo visais sidabriniais tvarsčiais pastebėjome neutrofilų ir makrofagų sumažėjimą biofilmais užkrėstų žaizdų, tačiau sumažėjimas buvo ryškesnis su deguonies druskos padažu. Šis sumažėjimas gali būti tiesioginis imuninio atsako į sidabrą rezultatas, atsakas į sumažėjusį biologinį apkrovą arba žaizda vėlesniame gydymo etape, todėl sumažėja žaizdos imuninės ląstelės. Sumažinus uždegiminių ląstelių skaičių žaizdoje, aplinka gali būti palanki žaizdų gijimui. Neaišku, kaip Ag oksisaltai skatina nuo infekcijų nepriklausomą gydymą, tačiau Ag oksisaltų gebėjimas gaminti deguonį ir sunaikinti kenksmingą vandenilio peroksido kiekį, uždegimo tarpininką, gali tai paaiškinti ir reikalauja tolesnio tyrimo17.
Lėtinės netyčinės užkrėstos žaizdos kelia problemą tiek gydytojams, tiek pacientams. Nors daugelis tvarsčių teigia, kad antimikrobinis efektyvumas, tyrimai retai sutelkia dėmesį į kitus pagrindinius veiksnius, darančius įtaką žaizdos mikroaplinkai. Šis tyrimas rodo, kad skirtingos sidabro technologijos turi skirtingą antimikrobinio veiksmingumą ir, svarbiausia, skirtingą poveikį žaizdos aplinkai ir gydymui, nepriklausomai nuo infekcijos. Nors šie in vitro ir in vivo tyrimai rodo šių tvarsčių veiksmingumą gydant žaizdų infekcijas ir skatinant gydymą, norint įvertinti šių padažų efektyvumą klinikoje, reikia atsitiktinių imčių kontroliuojamų tyrimų.
Dabartinio tyrimo metu naudojami ir (arba) analizuojami duomenų rinkiniai yra gauti iš atitinkamo autoriaus pagrįstos užklausos.
Pašto laikas: 2015 m. Liepos 15 d